Transgênicos são organismos que mediante técnicas de engenharia genética, contenham material genético de outros organismos. A geração de transgénicos visa um artigo transgénico biológico a obtenção de organismos com características novas ou melhoradas relativamente ao organismo original. Resultados na área de transgenia já são alcançados desde a década de 1970, na qual foi desenvolvida a técnica do DNA recombinante.
A manipulação genética recombina características de um ou mais organismos de uma forma que provavelmente não aconteceria na natureza. Por exemplo, podem ser combinados os DNAs de organismos que não se cruzariam por métodos naturais.
Podemos citar como exemplo a forma de obtenção da batata Achat:
As plantas de batata Achat foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens, usando a estirpe LBA4404, contendo o vetor binário pBI-PVY, com os genes que codificam para a proteína da capa protéica do vírus PVY da batata e o gene npt II que codifica para neomicina fosfotransferase II, que confere resistência à canamicina. As culturas foram crescidas, por 16 a 20 horas, em meio líquido LB (5 g.l-1 de extrato de levedura, 10 g.l de triptona, 10 g.l de cloreto de sódio), suplementado com 50mg.l-1 de canamicina e 100 mg.l-1 de spectinomicina, a 26-28°C, até atingirem uma
densidade ótica (OD600) de 0.7. Aliquotas de 15 ml da cultura foram centrifugadas a
5.000 rpm (Beckman J2-21, rotor 20), a 4°C, por 10 minutos, e o sedimento ressuspendido em meio LB. Cocultivo e seleção: segmentos nodais foram colocados em placa de Petri de 4,0cm de diâmetro e imersos na suspensão bacteriana, por 10 minutos. Em seguida, o excesso de inóculo foi retirado, colocando os explantes sobre papel de filtro estéril.
Então, os explantes foram tansferidos para meio de cocultivo, por 48 horas. Após, os segmentos nodais foram imersos, por 30 minutos, em meio com sais minerais e vitaminas MS, 3% de sacarose e, em mg.l-1: i-inisitol, 100; cefotaxima, 100 e carbemicilina, 500. Em seguida, foram cultivados em meio seletivo com sais minerais e vitaminas MS, 3% de sacarose, 100 mg l de i-inisitol, 3 mg.l de zeatina, 100 mg.l-1 de cefotaxima, 500 mg.l-1 de carbemicilina, 50 mg.l-1 de canamicina e 2 g.l-1 de gelrite. As brotações formadas foram enraizadas e as plantas desenvolvidas foram levadas para casa de vegetação onde foram desafiadas pelo vírus causador do mosaico, mediante inoculações mecânica.
A manipulação genética recombina características de um ou mais organismos de uma forma que provavelmente não aconteceria na natureza. Por exemplo, podem ser combinados os DNAs de organismos que não se cruzariam por métodos naturais.
Podemos citar como exemplo a forma de obtenção da batata Achat:
As plantas de batata Achat foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens, usando a estirpe LBA4404, contendo o vetor binário pBI-PVY, com os genes que codificam para a proteína da capa protéica do vírus PVY da batata e o gene npt II que codifica para neomicina fosfotransferase II, que confere resistência à canamicina. As culturas foram crescidas, por 16 a 20 horas, em meio líquido LB (5 g.l-1 de extrato de levedura, 10 g.l de triptona, 10 g.l de cloreto de sódio), suplementado com 50mg.l-1 de canamicina e 100 mg.l-1 de spectinomicina, a 26-28°C, até atingirem uma
densidade ótica (OD600) de 0.7. Aliquotas de 15 ml da cultura foram centrifugadas a
5.000 rpm (Beckman J2-21, rotor 20), a 4°C, por 10 minutos, e o sedimento ressuspendido em meio LB. Cocultivo e seleção: segmentos nodais foram colocados em placa de Petri de 4,0cm de diâmetro e imersos na suspensão bacteriana, por 10 minutos. Em seguida, o excesso de inóculo foi retirado, colocando os explantes sobre papel de filtro estéril.
Então, os explantes foram tansferidos para meio de cocultivo, por 48 horas. Após, os segmentos nodais foram imersos, por 30 minutos, em meio com sais minerais e vitaminas MS, 3% de sacarose e, em mg.l-1: i-inisitol, 100; cefotaxima, 100 e carbemicilina, 500. Em seguida, foram cultivados em meio seletivo com sais minerais e vitaminas MS, 3% de sacarose, 100 mg l de i-inisitol, 3 mg.l de zeatina, 100 mg.l-1 de cefotaxima, 500 mg.l-1 de carbemicilina, 50 mg.l-1 de canamicina e 2 g.l-1 de gelrite. As brotações formadas foram enraizadas e as plantas desenvolvidas foram levadas para casa de vegetação onde foram desafiadas pelo vírus causador do mosaico, mediante inoculações mecânica.
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